tissuelyser组织研磨机对提取小鼠尾巴rna的实验步骤-凯发真人

实验案例
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2020/12/21 12:03:21
tissuelyser组织研磨机对提取小鼠尾巴rna的实验步骤
来源:上海净信

实验步骤

1、首先将上海净信的组织研磨仪上的制冷模块预先置于适当的温度下,使用时取出安装好。将研磨珠去rna酶处理。

2、随机抽取小鼠的尾巴,把样本剪成尽可能小段,置于无rna酶的离心管中(选择耐液氮冷冻管子),同时加入几颗研磨珠。

3、放置于液氮中一起浸泡几分钟,取出放置于预冷模块中,在全自动样品研磨仪上选择合适的研磨时间和研磨频率。(该步骤可以根据研磨的细微程度要求可以再重复一遍)

4、把研磨好的样本加入的pbs和rnaiso plus(此处选择pbs,可以根据实验需要加入其他提取液,如trizol等),继续置于研磨机上选择合适的研磨时间和研磨频率。样本将处于糊状。(其他提取试剂有可能会出现泡沫,不影响实验)

5、取出研磨管,放入冷冻离心机中,选择适当的温度进行离心几分钟。

6、小心吸取上清液至新的离心管中,盖上管盖,在室温上孵育十几分种,使样品充分裂解至匀浆液较透明,如果仍有少量颗粒属于正常情况,不影响rna提取质量和得率。

7、在离心管中加入氯仿,盖紧管盖,振荡混匀并将其在冰上孵育几分种,选择适当的温度进行离心几分钟。离心后混合物分层:上清层,中间层,下层;rna存在于上清层中。

8、将上清层小心转移到一干净的离心管中,加入等体积冰浴的异丙醇,颠倒振荡混匀,将混合的样品在适当的温度条件下,孵育几分种,选择适当的温度进行离心几分钟。rna沉淀通常形成片状沉淀附着于管壁或管底。

小心弃去上清,用冰浴的乙醇洗涤rna沉淀一次,颠倒洗涤离心管管壁,并旋涡振荡样品,尽可能让沉悬浮,选择适当的温度进行离心几分钟,再次去除上清,晾干沉淀。

10、操作的最后,在阴凉处适度干燥rna沉淀(避免过分干燥,那样会降底它的可溶性)。

11、用适量的无rna酶水或te溶液来溶解rna。抽提好的rna,保存于适当的温度下。